ELISA完勝訣竅

       在70年代末期也有人采取否定的態(tài)度，全面肯定或全盤否定，這些都是不正確的，對(duì)一種新方法的建立和深入研究，要采取一分為二的方法加于評(píng)價(jià)，既要看到方法的優(yōu)點(diǎn)，也要重視存在的問題，便于進(jìn)一步研究加以克服。

1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
2)用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
3)用戶在初次使用試劑盒時(shí)，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。
4)每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
5)要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進(jìn)行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)，溫度環(huán)境為20%左右時(shí)，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進(jìn)行確定。
6)在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
7)吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
8).將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí)，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孑L壁接觸，液滴會(huì)自然流下去。吸入液體時(shí)的的方法是吸兩檔打一檔，防止由于槍頭的毛細(xì)作用使得部分液體不能流出而造成的誤差。
9)吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。
10)實(shí)驗(yàn)前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標(biāo)板只要取出所需量。
11)由于底物顯色劑對(duì)光及其敏感，因此要避光保存。
12)手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
13)檢測(cè)吸光度前應(yīng)將酶標(biāo)儀打開，將其預(yù)熱30min以上。
14)底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮膚。
15)孵育的時(shí)間應(yīng)該嚴(yán)格按照試劑盒說明書上的時(shí)間為準(zhǔn)。
16)對(duì)樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證。
17沒有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。
18)加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
19)顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
20)合理安排檢測(cè)量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
21)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
22)液體全部加入酶標(biāo)孔后，將酶標(biāo)板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應(yīng)。
23)洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
24)吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
25)要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。
26)為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
27)未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。
28)作時(shí)必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
29)試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
30)ELISA試劑盒不同批號(hào)試劑組分不得混用。
31)剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
32) 樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。