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    PCR儀反應(yīng)主要步驟

    更新時(shí)間:2015-10-21      點(diǎn)擊次數(shù):1842
    PCR儀的要素

    基本的PCR須具備

    1.要被復(fù)制的DNA模板 Template

    2.界定復(fù)制范圍兩端的引物Primers.

    3.DNA聚合酶Taq. Polymearse

    4.合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水。

        PCR儀工作原理

        利用升溫使DNA變性,在聚合酶的作用下使單鏈復(fù)制成雙鏈,進(jìn)而達(dá)到基因復(fù)制的目的。

        PCR的反應(yīng)包括三個(gè)主要步驟
    1. Denaturation 
    2. Annealing of primers,
    3. Extension of primers
    。 
        所謂 
    Denaturing乃是將DNA加熱(至90~95℃)變性, 將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板Annealing 則是令 Primers于一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著于模板DNA兩端。 zui后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加熱至70~75℃)進(jìn)行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。

        PCR的zui早設(shè)想核酸研究已有100多年的歷史,本世紀(jì)60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術(shù),Korana1971年zui早提出核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想:“經(jīng)過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復(fù)該過程便可克隆tRNA基因”。

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