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    酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析

    更新時間:2016-01-12      點擊次數(shù):1688
      酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析,酶標(biāo)儀在用單波長測定吸光度時,除受到測定內(nèi)源性干擾( 包括噪音、漂移、電壓等) 因素外,受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中,由于液面表面張力的作用,液體的表面不是一個平面,而是形成一個凹面,從側(cè)面看似凹透鏡,這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響,光線在通過液面時,除正常的被液體吸收一部分外,尚有部分被折射和反射( 如光線通過凹透鏡那樣) ,影響吸光度的檢測。而酶標(biāo)儀使用的又是通過光導(dǎo)纖維傳播的點光源,如果每次能在同一部位檢測,吸光度的重復(fù)性將得到保證,但由于機械運動等造成的誤差,不可能保證每孔都在相同部分被檢測,因此造成了孔與孔之間有一定的差異。
      酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析,在雙波長測定中,減少了測定干擾和電路干擾,因此測定結(jié)果明顯好轉(zhuǎn)。由于液體表面張力的不同, 導(dǎo)致單波長測定時誤差較大。 并且用不同的洗滌劑會影響到zui后加入底物和終止液后的液面情況,用加入表面活性劑的洗滌劑清洗后, 形成的液面更凹, 對單波長檢測的影響更大,并且與表面活性劑的濃度成正比。而用中性蒸餾水洗滌后,單、雙波長檢測技術(shù)結(jié)果基本一致。
      酶標(biāo)儀波長應(yīng)用分析,在酶聯(lián)免疫法測定抗原、抗體中,常用標(biāo)記酶辣根過氧化物酶所使用的底物一般是鄰苯二胺或四甲基聯(lián)苯胺,顯色終止后,二者在6 3 0nm 和6 5 5nm處的吸光度值都只在吸收峰處 (4 9 2 n m/4 5 0 nm )吸光度值的 1 %以下,因此,利用雙波長檢測,不會影響檢測的靈敏度。建議在進行酶聯(lián)免疫檢測時, 酶標(biāo)儀比色應(yīng)該首先雙波長。這樣可以提高臨界值處標(biāo)本的分析準(zhǔn)度, 減少實驗誤差。

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