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腦鈉肽(BNP)ELISA 試劑盒
競爭法可用于測定抗原,也可用于測定抗體。以測定抗原為例,受檢抗原和酶標(biāo)抗原競爭與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下:
⑴將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無抗原,則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原,則與酶標(biāo)抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合,競爭性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機會,使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原,保溫后,酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原多,故顏色深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差,代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測管顏色越淡,表示標(biāo)本中抗原含量越多。一般情況,是通過方波伏安法,檢測培養(yǎng)體系的峰電流,通過峰電流與抗原抗體的線性關(guān)系來終確定體系的終檢測目標(biāo)的濃度。
腦鈉肽(BNP)ELISA 試劑盒
當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競爭與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因此陽性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競爭結(jié)合反應(yīng)。競爭法測抗體有多種模式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競爭結(jié)合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競爭結(jié)合,洗滌后再加入酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)??笻Be的檢測一般采用此法。
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