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羥脂酰輔酶A脫氫酶 ELISA 試劑盒
定性測(cè)定
定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無(wú)"的簡(jiǎn)單回答,分別用"陽(yáng)性"、"陰性"表示。"陽(yáng)性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無(wú)反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果,即用滴度來(lái)表示反應(yīng)的強(qiáng)度,其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中,將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn),呈陽(yáng)性反應(yīng)的高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低,可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱,這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性更具定量意義。
在間接法和夾心法ELISA中,陽(yáng)性孔呈色深于陰性孔。在競(jìng)爭(zhēng)法ELISA中則相反,陰性孔呈色深于陽(yáng)性孔。
羥脂酰輔酶A脫氫酶 ELISA 試劑盒
競(jìng)爭(zhēng)法可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例,受檢抗原和酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合,因此結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下:
⑴將特異抗體與固相載體連接,形成固相抗體。洗滌。
⑵待測(cè)管中加受檢標(biāo)本和一定量酶標(biāo)抗原的混合溶液,使之與固相抗體反應(yīng)。如受檢標(biāo)本中無(wú)抗原,則酶標(biāo)抗原能順利地與固相抗體結(jié)合。如受檢標(biāo)本中含有抗原,則與酶標(biāo)抗原以同樣的機(jī)會(huì)與固相抗體結(jié)合,競(jìng)爭(zhēng)性地占去了酶標(biāo)抗原與固相載體結(jié)合的機(jī)會(huì),使酶標(biāo)抗原與固相載體的結(jié)合量減少。參考管中只加酶標(biāo)抗原,保溫后,酶標(biāo)抗原與固相抗體的結(jié)合可達(dá)充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色:參考管中由于結(jié)合的酶標(biāo)抗原多,故顏色深。參考管顏色深度與待測(cè)管顏色深度之差,代表受檢標(biāo)本抗原的量。待測(cè)管顏色越淡,表示標(biāo)本中抗原含量越多。一般情況,是通過(guò)方波伏安法,檢測(cè)培養(yǎng)體系的峰電流,通過(guò)峰電流與抗原抗體的線性關(guān)系來(lái)終確定體系的終檢測(cè)目標(biāo)的濃度。
當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時(shí),可用此法檢測(cè)特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合。標(biāo)本中抗體量越多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少,因此陽(yáng)性反應(yīng)呈色淺于陰性反應(yīng)。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會(huì)有干擾物質(zhì),直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì),然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)。競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體有多種模式,可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標(biāo)本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合,洗滌后再加入酶標(biāo)抗體,與結(jié)合在固相上的抗原反應(yīng)。抗HBe的檢測(cè)一般采用此法。
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