基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-3）ELISA 試劑盒

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①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，后結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來進行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地放大反應(yīng)效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。

ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：

①固相的抗原或抗體

②酶標記的抗原或抗體

③酶作用的底物（顯色劑）。根據(jù)試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-3）ELISA 試劑盒

夾心法

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

1. 將具有專一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

2. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

3. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進行鍵結(jié)

4. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)

5. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-3）ELISA 試劑盒

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

5.   測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

6.   根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。