基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9）ELISA 試劑盒

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基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9）ELISA 試劑盒

ELISA用血清來檢測，首先血液要經(jīng)過至少半個小時的凝集，然后取血清。將酶復(fù)合物用稀釋液稀釋后，加血清及陰性、陽性對照，還有就是質(zhì)控品（這是嚴格的要求，它的范圍必須在質(zhì)控范圍內(nèi)）。經(jīng)過一個小時的孵育，然后洗板，加底物，半個小時避光反應(yīng)后加終止液即完成反應(yīng)部分，然后就是讀數(shù)。由數(shù)值來判斷結(jié)果的陰性或陽性。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9）ELISA 試劑盒

競爭法

1. 競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

2. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

3. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)

4. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來。

5. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

   當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl；在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

5.   測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

6.   根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。